土屋昌次是金丸筑前守虎义的次子,幼名平八郎,武田信玄的“奥近习六人众”之一(另外五个是三枝守友、武藤喜兵卫、甘利昌忠、曾根昌世和长坂源五郎),武田家年轻一代里的猛将,对野战和城战都出众的才能。
土屋昌次的初阵就是第四次川中岛合战,当时他年仅十七岁。
在这场战役中,他表现异常活跃,负责守卫信玄的本阵,毫无惊慌失措,在上杉军的猛攻之下,始终不曾后退过一步,他的武勇连信玄也为之感慨。
这场战役之后,昌次因功被信玄要求继承武的名族土屋氏并正式改名为土屋昌次。
在三方原合战中,土屋昌次接受德川氏大将鸟居元忠的一骑讨,并且击败了鸟居元忠,因此而得到了双方的赞扬。
土屋昌次是信玄近侍出身,对信玄十分忠诚。
在信玄病死之后,曾意欲殉死追随信玄公而去,但是为弾正忠正高坂昌信所劝。
(当时高阪昌信不也总想自杀殉死么……) 长篠合战中,土屋昌次和穴山信君、马场信房、真田信纲、真田昌辉、一条信龙率领三千骑兵的武田军右翼队。
面对织田信长的三千支铁炮,昌次所在的部队虽然突破了第二道防马栅,但还是被铁炮挡在了最后一道防马栅之后。
5月21日下午1时,昌次在随山县昌景一起突破马防栅冲锋攻击时,两人均遭铁炮击中身亡,昌次时年仅三十二岁。
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